Název: Molekulární charakterizace faktorů účastnících se tvorby cystové stěny Giardia intestinalis.
Překlad názvu: Molecular characterization of the factors participating in the formation of Giardia intestinalis cyst wall.
Autoři: Pastyříková, Aneta ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Hrdý, Ivan (oponent)
Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok: 2022
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
1 Abstrakt Povrch cyst Giardia intestinalis pokrývá silná vláknitá stěna poskytující parazitovi potřebnou ochranu před vnějším prostředím. Materiál cystové stěny se skládá z proteinů a sacharidů. Hlavní sacharid, unikátní β-1,3-N-acetylgalaktosaminový homopolymer (označovaný jako Giardan), je syntetizován z glukózy cytosolickými enzymy indukovanými během encystace. Tato práce se zaměřuje na ověření biosyntézy Giardanu a funkční charakterizaci UDP-N-acetylglukosamin 4'- epimerázy (UA4E), jednoho z enzymů účastnících se syntetické dráhy. Pro tyto účely byl odpovídající gen cíleně odstraněn za využití systému CRISPR/Cas9. Byla získána stabilní buněčná linie, ve které byly odstraněny všechny čtyři kopie genu UA4E. Úspěšnost genového knock-outu byla potvrzena na základě proteomické analýzy. Pomocí fluorescenční mikroskopie jsme pozorovali, že ΔUA4E buňky indukované k encystaci jsou schopny iniciovat encystační procesy a procházet buněčnou diferenciací. U buněk byla pozorována přítomnost ESV váčků a typické morfologické znaky odpovídající cystám. Tato stadia však měla tenkou povrchovou vrstvu a nebyla schopna vytvořit typickou silnou stěnu s fibrilárním vzhledem na jejich povrchu, což vedlo k následné produkci neživotaschopných cyst. Klíčová slova Giardia intestinalis, Giardan, UDP-N-acetylglukosamin... 1 Abstract The surface of Giardia intestinalis cysts is covered by a thick fibrillar wall providing the parasite with the necessary protection against the external environment. The cyst wall consists of proteins and carbohydrates, among which is a unique β-1,3-N-acetylgalactosamine homopolymer (known as Giardan). This carbohydrate is synthesized from glucose by cytosolic enzymes induced during encystation. This thesis focuses on the biosynthesis of Giardan and the functional characterization of UDP-N-acetylglucosamine 4'-epimerase (UA4E), one of the enzymes involved in the synthetic pathway. For these purposes, the corresponding gene was targeted using the CRISPR/Cas9 system. A stable cell line was obtained in which all four copies of the UA4E gene were deleted. The success of gene knock-out was confirmed on the basis of proteomic analysis. Using fluorescence microscopy, we observed that ΔUA4E cells induced to encystation are able to initiate encystation processes and cell differentiation. The presence of ESV vesicles and typical morphological changes corresponding to cysts were observed in the cells. However, these stages had a thin surface layer and were unable to form typical thick wall with fibrillar appearance at their surface leading to the subsequent production of non-viable cysts. Key words Giardia...

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/176504

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-509915


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Diplomové práce